本发明属于生物技术领域，特别是涉及一种检测绵羊肺炎支原体的检测方法，其中包括特异性目标序列，如SEQ ID NO.1所示，试剂盒包括荧光定量PCR检测引物对和探针，引物对如SEQ ID NO.2所示和SEQ ID NO.3所示；探针的序列如SEQ ID NO.4所示的。本发明设计的用于检测检测绵羊肺炎支原体的TaqMan探针荧光定量PCR试剂盒具有很高的特异性和灵敏性，能够用于筛选各临床样品检测绵羊肺炎支原体阳性样本，具有检测时间短，检测灵敏度高，稳定性高的特点。