本发明公开了一种快速建立HPLC梯度洗脱程序的方法，涉及HPLC检测技术领域。本发明采用全谱‑展开‑加节点三步法；第一步，通过拉全谱，在梯度图上快速确定初始比例和终止比例；第二步，利用初始比例和终止比例，将样品展开到合适分析时间；第三步，根据色谱峰的疏密加节点，进一步细分未分开的色谱峰。本发明适合快速建立中药样品、复杂样品或未知样品的HPLC梯度洗脱程序，也可快速获取简单成分样品的等度比例，具有广泛的应用价值和教学价值。