本发明公开了一种绵羊皮肤成纤维细胞系及其培养方法与应用。该细胞系名称为LSF‑2，保藏编号为：CGMCC NO.23100。该细胞系第50代的细胞仍保持原代细胞的形态特征，没有染色体变异。该细胞系对山羊痘病毒高度易感，其培养的山羊痘病毒比用2月龄原代羊睾丸细胞毒价至少高1.5个滴度，并且具有低血清培养、增殖速度快、易于放大、病变快、效价高的特点。用该细胞系进行山羊痘疫苗的生产实现了山羊痘病毒的传代细胞培养工艺，用低血清培养大大降低了生产成本，保证了批间稳定性，对疫苗产业化生产具有重要意义。