发明公开了一种非洲猪瘟病毒的基因工程病毒毒株，其亲本毒株微生物保藏号为CCTCC NO:V202318，其基因组中，MGF_505‑1R基因、MGF_505‑2R基因、MGF_505‑3R基因、MGF_360‑12L基因、MGF_360‑13L基因、MGF_360‑14L基因和EP402R基因为失活的基因。本发明还公开了该基因工程病毒毒株的制备方法，含有该基因工程病毒毒株的疫苗组合物，以及该基因工程病毒毒株的在制备用于预防非洲猪瘟的制剂中的用途。该基因工程病毒毒株安全性好，免疫有效性好，具备制备临床应用的疫苗的潜质。