本发明属于分子生物学和疾病诊断技术领域，具体涉及乳头溢液中基因外显子突变位点在乳腺癌诊断中的应用。为解决现有技术中乳腺癌诊断标志物在早期乳腺癌鉴别诊断中价值有限的问题，本发明研究发现，P53、PIK3CA及Gata3在乳腺癌患者的乳头溢液中可检测到特定外显子位点的突变，可能与肿瘤发生、进展相关，而在功能性溢液患者的乳头溢液中未能检测到上述突变。乳头溢液中P53、PIK3CA及Gata3外显子特定位点突变的联合检测可以作为乳腺癌潜在的诊断标记物。