本发明涉及生物技术领域，具体公开了杂交瘤细胞对、单克隆抗体对及其在检测牛筋草EPSPS蛋白中的应用。本发明的杂交瘤细胞对，其包括第一杂交瘤细胞株EP001‑1和第二杂交瘤细胞株EP001‑2；所述第一杂交瘤细胞株EP001‑1的保藏编号为CGMCC NO.45609；所述第二杂交瘤细胞株EP001‑2的保藏编号为CGMCC NO.45610。利用本发明的杂交瘤细胞对制备单克隆抗体对后，形成胶体金试纸可实现现场快速对牛筋草叶片、茎和种子等样品中的EPSPS蛋白的检测。