本发明公开了一种熊去氧胆酸的合成方法，步骤包括：将鹅去氧胆酸用磷酸缓冲液溶解后加入NADP+、谷胱甘肽还原酶、谷胱甘肽、7α‑羟基类固醇脱氢酶，充分反应后猝灭7α‑羟基类固醇脱氢酶和谷胱甘肽还原酶后继续加入NADPH、乙醇脱氢酶、异丙醇、7β‑羟基类固醇脱氢酶，充分反应后加入氢氧化钠升温搅拌，搅拌后降温至常温，过滤，向滤液加酸结晶后得到UDCA。本发明酶促反应条件温和，不涉及化学法中的各种溶剂、氧化剂和还原剂，副产物少，不产生有机废渣，有毒物等，对环境友好。底物转化率高，可定向异构化。本发明与传统两步生物法合成相比实现了辅酶的循环使用，提高了催化效率和底物承载能力，明显降低反应成本，获得的产物纯度更高。