本发明公开了一种区分肿瘤细胞和非肿瘤细胞的基因集、方法、介质及设备，涉及生物信息技术领域。根据基因在肿瘤细胞和非肿瘤细胞中的基因表达量的差异，将肿瘤细胞中显著表达的基因进行筛选过滤，得到目标基因集，可以用于区分肿瘤细胞和非肿瘤细胞；利用目标基因集对待测细胞进行鉴定，得到鉴定分数，群体细胞为与待测细胞属于同一组织的多个细胞，依据群体细胞的鉴定分数获得分界值，若鉴定分数大于分界值则为肿瘤细胞，若鉴定分数不大于分界值则为非肿瘤细胞，可以有效区分肿瘤细胞和非肿瘤细胞。