本发明公开了一种生产甘油葡糖苷的方法。该方法以甘油和蔗糖作为底物，用蔗糖磷酸化酶对底物进行催化反应，得到含有甘油葡糖苷的产物，反应体系含水但不含缓冲液。该方法不需要缓冲溶液的参与，反应体系更简单，仅包含底物蔗糖和甘油，以及全细胞催化剂三种组分，排除了缓冲液离子存在对GG下游分离纯化带来的干扰，一定程度上简化了GG的下游分离纯化工艺。本发明还进一步通过优化反应分批补料次数和加料时间，提高蔗糖磷酸化酶合成GG的催化效率，缩短反应周期。具有很大的工业化应用潜力。