本发明公开了特异性识别鼠伤寒沙门氏菌的非标记型适配体生物传感器及其检测方法与应用，具体公开特异性识别鼠伤寒沙门氏菌的非标记型适配体生物传感器，所述非标记型适配体生物传感器包括：鼠伤寒沙门氏菌的非标记型适配体、与鼠伤寒沙门氏菌的非标记型适配体互补的寡核苷酸、SYBR Green I核酸染料；本发明中以结合缓冲液(BB)为筛选环境得到的适配体非标记型适配体A和以猪肉基质为筛选环境得到的非标记型适配体B分别构建无标记荧光的适配体传感器，并且提供了一种高灵敏度、高选择性的荧光定量检测方法，实现了较低成本且快速检测鼠伤寒沙门氏菌的目的。在本发明中，利用染料的荧光强度的变化实现对鼠伤寒沙门氏菌的检测。