本发明公开了对叶百部多糖及其制备方法和应用。将干燥粉碎的对叶百部根按照料液比1:20‑1:60g/ml加入到纯水中，再按浓度10％‑50％,w/v g/ml加入(NH4)2SO4，pH值调节至4‑9，搅拌均匀，然后按提取液:叔丁醇＝1:5‑1:0.05v/v的比例添加叔丁醇，再在温度20‑80℃振荡提取20‑100min，收集水溶性化合物下相，蒸馏水透析，浓缩并冷冻干燥，得到纯化的对叶百部多糖。本发明经过实验发现，本发明的提取方法的总糖含量、提取率显著高于传统提取方式，蛋白质含量低于传统提取方式，TPP多糖的纯度高于传统多糖。