本发明涉及生物检测技术领域，尤其涉及一种检测布鲁氏菌抗原量子点微球免疫试纸卡及制备方法和应用。免疫试纸卡，包括PVC底板，在PVC底板上按顺序依次固定有样品垫、量子点结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫；量子点结合垫内包被有量子点标记抗布鲁氏菌单克隆抗体；硝酸纤维素膜表面上设置有检测线和质控线，检测线内包被有抗布鲁氏菌单克隆抗体，质控线内包被有羊抗鼠IgG抗体。本发明的免疫试纸卡适用于带有牛和羊阴道分泌物和流产胎儿羊水的拭子内布鲁氏菌的检测，可在短时间内诊断出布鲁氏菌感染，特别适合现场布鲁氏菌感染诊断、流行病学调查和活牛/羊国际贸易检疫检验，具有使用方便、操作迅速简单、准确率高的技术优势。