本发明公开了一种乳酸菌原位富集珠及其制备方法，属于生物技术领域，所述的乳酸菌原位富集珠，包括以下重量份的组分：100～300份芥菜汁、10～80份番茄汁、0.5～8份复合酸、0.2～2份吐温‑80、0.3～3份丙酸钙、2～6份凝固剂。本发明的富集珠稳定性好，适用性强，使用方便，能够抑制杂菌生长繁殖、促进乳酸菌生长，从而方便乳酸菌富集；通过本发明的富集珠进行乳酸菌的富集，该富集珠对乳酸菌有较强的吸引力，同时对芽孢杆菌、放线菌、酵母菌及霉菌的生长繁殖具有一定抑制作用，从而可以大大简化乳酸菌分离纯化工作，该方法操作简单，分离乳酸菌效率高且成本低具有较强的推广价值。