本发明公开了一种兔支气管败血波氏杆菌灭活疫苗乳剂及其制备和应用，该疫苗乳剂是将作为油相的疫苗佐剂和水相以体积比2：1混合在14000rpm/min下乳化2min获得的；其中，所述疫苗佐剂包含：司班‑80、注射用大豆油和茶皂甙；所述水相包含：灭活兔支气管败血波氏杆菌全菌蛋白和吐温‑80。本发明佐剂使用可注射用植物油替代传统兽用疫苗中使用的矿物油或铝胶佐剂，提高安全性的同时，也减轻了动物免疫疫苗后产生的局部副作用，关注动物福利保护。而且，本发明的疫苗乳剂经皮下注射免疫，克服了现有疫苗注射造成的免疫部位明显副作用及免疫效果不理想等缺点。