本发明提供了兼具多酶催化活性的单原子缺陷碳量子点纳米酶及其制备方法和应用，制备方法包括：1）将邻苯二胺与金属前驱体盐混合，氮气保护下，低温煅烧，得到铁与氮弱配位的中间体1；2）在步骤1）得到的中间体1中加入设定浓度的酸溶液，烘干，醇洗涤，过滤，烘干，得到单原子缺陷中间体2；3）将步骤2）得到的单原子缺陷中间体2于氮气保护下，高温煅烧，得到单原子缺陷碳量子点纳米酶固体。本发明设计的单原子缺陷碳量子点纳米酶结构中富含金属缺陷、单原子活性中心和载体碳量子点本身的下转换特性等多重功能，可用于促进正常环境和胁迫环境下的植物生长，具有广泛的应用前景。