本发明公开了一种含镁DNA水凝胶和可注射伤口敷料的制备方法及其应用。含镁DNA水凝胶的制备方法包括制备环形模板DNA和利用滚环扩增反应制备得到含镁DNA水凝胶的步骤。本发明在滚环扩增反应中将长链DNA和焦磷酸镁组装成超软DNA水凝胶，操作简便，产物易于制备，形成的超软DNA水凝胶骨架不仅具有可注射性，且能够同时负载亲疏水药物；负载亲水药物环丙沙星以抑制细菌生长；负载疏水药物姜黄素以增强DNA的活性氧清除和炎症调节能力。伤口愈合过程中，镁离子从DNA水凝胶中逐渐释放出来，进一步促进了血管生成相关蛋白的表达。