本发明属于药用植物孢子繁育技术领域，具体涉及一种槲蕨孢子诱导原叶体的组培培养基和方法及应用。本发明提供了一种槲蕨孢子诱导原叶体的组培培养基，包括孢子萌发液体培养基和固体增殖培养基；在本发明提供的组培培养基中，6‑BA(6‑苄氨基嘌呤)刺激细胞分裂促进孢子萌发和原叶体的形成；NAA(1‑萘乙酸)促进孢子萌发和原叶体的生长；GA3(赤霉素)促进孢子萌发，使孢子萌发时间缩短；2,4‑D(2,4‑二氯苯氧乙酸)促进原叶体的形成。蔗糖为孢子萌发和原叶体的形成提供能源物质。本发明的方法操作简便易行，能够降低采用分株繁殖对原植株的伤害和降低生产成本。