本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种新型冠状病毒纳米颗粒重组蛋白疫苗抗原含量检测方法及其应用。为了解决新型冠状病毒纳米颗粒疫苗抗原定性和定量、体外效价评估和佐剂吸附效率判定等问题，本发明建立了一种新的检测手段，根据蛋白纳米颗粒大分子的物理特性，针对组成VLP纳米颗粒的不同蛋白设置两种抗体，即分别设计针对VLP铁蛋白内核的兔抗Anti‑HPF抗体，以及识别VLP表面偶联RBD抗原的HRP标记兔抗Anti‑RBD抗体，从而精确检测纳米颗粒重组蛋白疫苗的抗原含量，该检测方法具有操作便捷、成本低廉，实验室要求低，安全性高等优点，普通级别的实验室即可实施，具有较好的应用前景。