本发明涉及一种响应性水凝胶及其制备方法和应用，属于医用水凝胶技术领域。所述制备方法为：将可被基质金属蛋白酶切割的多肽进行EDCI/NHS活化，得到活化的可被基质金属蛋白酶切割的多肽的溶液；将Tetra‑PEG‑NH2与活化的可被基质金属蛋白酶切割的多肽的溶液混合并反应，得到偶联有可被基质金属蛋白酶切割的多肽的Tetra‑PEG‑pp‑NH2；将Tetra‑PEG‑pp‑NH2配成第一前体溶液，将磷脂酰丝氨酸与四臂聚乙二醇琥珀酰亚胺戊二酸酯混合并配成第二前体溶液，将第一前体溶液和第二前体溶液混合后静置成胶，制得响应性水凝胶。本发明中的响应性水凝胶可有效控制释放磷脂酰丝氨酸，能有效促进骨缺损修复。