本发明公开了一种抗百草枯的纳米抗体及其应用，本发明通过百草枯半抗原PH‑Q与ConA(刀豆球蛋白A)偶联得到的人工抗原作为免疫原免疫骆驼，构建一种噬菌体展示纳米抗体文库，并从噬菌体展示纳米抗体文库中筛选得到一种针对百草枯农药的纳米抗体Nb‑2‑34。在抗百草枯纳米抗体Nb‑2‑34的基础上，本发明进一步提供一种检测百草枯的NHS磁珠‑微流控免疫检测方法，该方法操作简单，快速，结果准确可靠，灵敏度高，对百草枯的检测限为0.0028ng/mL，线性范围为0.064～1000ng/mL，可实现国家标准中最大残留限量浓度范围的广泛检测。