本发明属于生物传感器技术领域，具体涉及一种纳米酶修饰的三螺旋分子开关及其在生物传感器中的应用。本发明创新性地引入纳米酶修饰三螺旋分子开关，其具有内在的目标触发构象变化机制，可以通过特定的构象变化实现高特异性目标物识别，适配体与目标物识别结合后从分子开关中解离，从而暴露出具有高催化能力的纳米酶催化检测体系中H2O2的分解，完成信号转换的同时基于纳米酶的高催化能力实现信号放大，从而有效提高检测的灵敏度；同时基于均相策略的检测机制可以有效提高抗干扰能力；本发明所构建的检测平台具有良好的普适性，通过更换适配体序列可实现多种目标物质的检测。