本发明公开了一种半乳糖氧化酶突变体GAO‑AR/HT、基因、质粒、重组菌及其应用，属于酶工程领域，所述半乳糖氧化酶突变体GAO‑AR/HT的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，与半乳糖氧化酶GAO‑5F/AR相比，第484位精氨酸突变为组氨酸，第634位丝氨酸突变为苏氨酸。本发明还提供了编码所述突变体的基因及含有该基因的重组质粒和重组工程菌株。所述突变体的半乳糖氧化酶活性是GAO‑5F/AR的3倍，能够催化半乳糖产生半乳糖醛酸，且产物含量是GAO‑5F/AR的1.5倍。