本发明公开了一种维生素B2的分离纯化方法，应用于去除维生素B2中邻苯二甲酸二正丁酯（DBP），包括步骤（1）维生素B2溶解，将一定量维生素溶解在盐酸中，其中，盐酸为的浓度大于14%；溶解温度为70‑80℃；维生素B2与浓盐酸的质量体积比为1:20‑28；步骤（2）吸附，附剂为椰壳原料制备的活性炭，活性炭的粒径小于300目，吸附剂的添加量按维生素B2溶液体积与质量比为1:0.001~1:0.005，吸附温度为25‑40℃，吸附时间为1‑5h，步骤（3）结晶为步骤（2）过滤后加入一定量的水，对维生素B2进行结晶、过滤；步骤（4）水洗和干燥。本发明提供的方法溶解速度快，生产效率高，对维生素B2中增塑剂的去除效果明显。