本发明提出了一种用于化学发光分析测定的高效HOOK效应判定法，(1)：将待测样本与供体试剂、受体试剂快速充分混匀后形成能发生化学发光反应的待测混合物；(2)：混匀后反应T1时间，使用波长320nm的激发光来激发所述待测混合物发生化学发光反应，记录所述化学发光的信号强度为Signal 1；步骤(3)将预读数后的待测混合物转移至孵育盘，继续孵育T2时间；(4)：孵育完成后，使用波长320nm的激发光来激发所述待测混合物发生化学发光反应，记录所述化学发光的信号强度为Signal 2；(5)：根据Signal1和Signal 2的读数进行判定即可。本发明仅需一次预读数就能判定反应中是否会产生HOOK效应，有效减少操作步骤，不影响反应过程与检测通量，在减少手工操作误差的同时，更为方便快捷。