本发明公开了一株高产L‑苹果酸的黑曲霉基因工程菌株及构建方法和应用。本发明以经紫外诱变所得的高产L‑苹果酸菌株为出发菌株，利用基因敲除技术破坏草酰乙酸水解酶基因oah，并过表达了黑曲霉来源的四碳二羧酸转运蛋白基因dct3，从而获得了高效生产L‑苹果酸的基因工程菌株。经过72小时摇瓶发酵，L‑苹果酸的含量可达到21.08g/L；与出发菌株相比，转化率由0.08mol/mol提高到0.123mol/mol，提高了54％。将本发明的基因工程菌株应用于L‑苹果酸的发酵生产，能够显著提高L‑苹果酸的产量，且发酵周期短，L‑苹果酸的纯度高，满足了食品领域严格的生产菌株要求，为L‑苹果酸生产提供了优异菌株。