本发明提供了一种用于非洲猪瘟病毒重组毒株、Ⅰ型及Ⅱ型毒株鉴别的双重荧光定量PCR组合物及试剂盒，属于病毒检测技术领域。该PCR组合物由MGF_110‑1L和O61R的引物及探针组成，MGF_110‑1L引物及探针用于检测I型毒株，O61R引物及探针用于检测II型毒株。本发明所提供的检测方法通过提取样品DNA进行双重荧光定量PCR，并根据两通道结果判定毒株类型。该方法检测灵敏度高，能检测2.95×10‑1copies，并且该方法的特异性好，仅检出目标病毒。除此之外，该方法的重复性好，变异系数在0.12％‑0.51％。