本发明提供了一种再造梗丝中关键大分子的检测方法及其应用，所述检测方法包括以下步骤：(1)将待测样品与中性洗涤剂混合，之后与淀粉酶、消泡剂混合，过滤得到预处理样品；(2)将预处理样品与酸混合酸解，得到上清液和滤渣；(3)将上清液进行衍生化反应，之后进行液相色谱检测，得到上清液中单糖含量，计算纤维素和半纤维素含量；(4)将上清液进行吸光度检测，根据检测结果计算酸溶木质素含量；将滤渣烘干、灰化，根据灰化前后质量变化计算酸不溶木质素含量。本发明提供的检测方法能够同时检测再造梗丝中的三种关键大分子的含量，实现了纤维素、半纤维素和木质素的集成分析。