本发明提供一种聚集诱导发光微球及其制备方法和应用，所述制备方法包括如下：(1)将聚苯乙烯微球分散于水中，向其中加入有机溶剂进行溶胀，得到预溶胀聚苯乙烯微球的分散液；(2)将所述预溶胀聚苯乙烯微球的分散液与聚集诱导发光荧光染料溶液混合，离心分离，得到所述聚集诱导发光微球；所述聚集诱导发光荧光染料为Eu配合物。所述制备方法通过特定的聚集诱导发光荧光染料与溶胀法的设计和相互结合，使得到的聚集诱导发光微球的染料装载量大，荧光强度和发光效率高，粒径均一，单分散性好，稳定性和均一性优异，环境耐受性好。所述聚集诱导发光微球可作为信标探针，实现高灵敏度的分析检测。