本发明公开了一种辅酶I晶型及其应用，涉及烟酰胺腺嘌呤二核苷酸制备技术领域；所述辅酶I晶型为三斜晶系，且具有Pl或Pl的空间基团；晶格常数为：α＝109.803°，β＝90.697°和γ＝103.709°。本发明提供的辅酶I晶型具有高结晶度的水合物晶型，具有良好的固态性质，有效成分含量明显高于冻干原料的样品，且最大单质和总杂都显著低于冻干原料的样品，并且随着保存时间过得延长，保存至12个月最大单质和总杂含量都没有明显提高。