本发明公开了一种比率型荧光探针的制备方法及其在溴代十六烷基吡啶检测中的应用，先以硫脲为硫源，β‑环糊精为保护剂，过氧化氢为氧化剂，制得硫量子点SQDS@β‑CD，再以硫量子点和曙红Y设计制备比率型荧光探针EY‑SQDS@β‑CD。该比率型探针在412 nm和548 nm处有两个发射峰，溴代十六烷基吡啶能够使548 nm处的发射峰荧光强度降低，而412 nm处的发射峰荧光强度基本不变。同时本发明构建了一种基于比率型荧光探针检测溴代十六烷基吡啶的新方法。本发明研发的比率型荧光探针将有效克服仪器和环境等因素对溴代十六烷基吡啶测定的干扰，进一步提高测定结果的可靠性。