本发明公开了一种三氟芳基硫醇马来酰亚胺衍生物的制备方法及其应用，属于生物技术领域，该方法具体为：有机溶液中加入盐酸羟胺和NaOAc，常温下搅拌一段时间后，随后向该反应液中加入化合物KJ，反应体系加热回流，期间，用TLC监测反应进行程度。待反应结束后，冷却至室温，减压除去有机溶剂，分离纯化得到淡黄色固体三氟芳基硫醇马来酰亚胺衍生物KO，本发明的制备方法简单，获得的三氟芳基硫醇马来酰亚胺衍生物KO具有较高的抗肿瘤活性，能有效抑制肿瘤增生，使肿瘤细胞的迁移和侵袭能力明显受损，能够应用于制备抗癌药物、抗癌药物组分。