本申请属于免疫检测技术领域，公开了一种抗人乙酰化tau281兔单克隆抗体及其应用。本申请提供的抗人乙酰化tau281兔单克隆抗体，包含轻链可变区和重链可变区，所述轻链可变区包括LCDR1‑3，所述LCDR1包含如SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列，所述LCDR2包含如SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列，所述LCDR3包含如SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列；所述重链可变区包括HCDR1‑3，所述HCDR1包含如SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列，所述HCDR2包含如SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列，所述HCDR3包含如SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列。本申请的兔单克隆抗体可与人乙酰化tau281蛋白高特异性结合，将其应用于双抗体夹心ELISA中，检测人乙酰化tau281标准抗原，检测灵敏度小于78 pg/ml。