本发明属于细胞生物学和药物筛选技术领域，尤其涉及一种用于高通量筛选TRPV1受体抑制剂的细胞系及其构建方法和应用。本发明提供的细胞系稳定表达GCaMP8m序列和TRPV1受体序列，所述GCaMP8m序列存在于细胞质中，所述TRPV1受体序列存在于细胞膜上，所述GCaMP8m序列和TRPV1受体序列的摩尔比为1：1。该细胞系能够有效排除其他钙离子通道对实验的干扰，准确而客观地反映TRPV1的通道活性，克服了现有技术无法准确反映TRPV1通道活性的缺点，利用该细胞系能够进行TRPV1受体抑制剂的高通量筛选。