本发明公开了一种鱼腹腔白细胞的分离收集用辅助固定装置及方法，包括操作台，所述操作台上端面开设有用于将鱼腹部朝天放置的椭圆形凹槽；椭圆形凹槽的短轴两端对称设有可调节鱼肚支撑机构，椭圆形凹槽的长轴两端对称设有可调节鱼头/尾固定机构；还包括用于将鱼腹部固定撑开的弹簧夹。本发明将有助于研究人员快速分离鱼类腹腔白细胞，提升鱼类腹腔白细胞分离效率；并提供一种稳定高效的鱼类腹腔白细胞分离方法，解决研究人员在鱼类腹腔白细胞分离中遇到的操作难、效率低等问题；本发明操作简单、适用性广、分离效率高、装置轻便，装置成本较低。