本发明涉及一种雌激素的液相色谱串联质谱检测方法，属于微量有机物检测技术领域。包括如下步骤：S1、采用液相色谱串联质谱法对雌激素进行检测，其中：检测雌激素的液相色谱条件：选用反相色谱柱，甲醇和0.3％氨水溶液作为流动相；检测雌激素的质谱条件：采用电喷雾负离子模式，动态多反应监测扫描方式；S2、基于步骤S1的检测雌激素的液相色谱条件和质谱条件，验证检测雌激素液相色谱串联质谱检测方法的线性范围和灵敏度。本发明检测速度快，灵敏度高，在线性范围1‑100ng/mL范围内，4种雌激素方法检出限范围是0.030–0.044ng/mL，方法定量限范围是0.10‑0.15ng/mL。