本发明涉及一种快速有效分离提取土壤样品中雌激素的前处理方法及应用，其包括如下步骤：将采集的土壤样品进行冷冻干燥，粉碎过筛，与等质量的硅藻土混合均匀，使用快速溶剂萃取仪提取固体样品中的雌激素；然后使用平行蒸发仪浓缩提取液体积至1‑1.5mL；在提取液中加入碱液混匀后，再加入等体积的正己烷/甲基叔丁基醚进行液液萃取提取目标化合物，将萃取液在氮气流下缓慢吹至近干，将底物用有机溶剂溶解定容至1mL，涡旋、过滤后转移到进样瓶中，待测；高效液相色谱‑串联质谱联用仪测定进样瓶中样品的雌激素浓度。本发明提供了一种操作便捷、过程简单的分离纯化土壤中雌激素的前处理方法，缩短前处理时间，降低实验成本，提高样品检测效率。