本发明公开了一种针对大鼠肝脏彗星试验的检测方法，包括以下步骤：大鼠肝脏组织的采集；使用采集后的部分大鼠肝脏组织进行单细胞悬液的制备；采用单层双孔彗星试验用玻片进行铺片处理；对铺片处理后的样本进行低温细胞裂解处理；对上一步处理后的样本DNA解旋及电泳处理；对上一步处理后的载玻片进行染色处理以及观察；使用CASP1.2.3beta2软件进行分析；对溶媒对照组和各剂量组进行检查。本发明通过电泳和染色步骤，可以观察DNA的拖尾情况，其中尾DNA％可反映DNA的损伤水平，有助于了解给药或染毒后是否引起了DNA的损伤，并且通过分析刺猬细胞的发生率，可以更全面地了解DNA损伤的性质和程度，且固定了某些操作步骤的变量，方便试验操作。