本发明公开了一种用于子宫内膜癌鉴别诊断的代谢生物标志物，包括谷氨酰胺、葡萄糖和胆固醇亚油酸酯中至少一种物质的任意组合，上述生物标志物的筛选方法，包括如下步骤：使用纳米颗粒增强激光解吸电离飞行时间质谱技术，对大量血清样本进行血清代谢组数据采集；对血清代谢组数据进行机器学习；进行血清中代谢生物标志物鉴定和筛选，确定用于子宫内膜癌鉴别诊断的生物标志物。本发明提供了一种简单、创伤小并能够更精准地实现子宫内膜癌断的生物标志物及其筛选方法。