本发明涉及生物技术领域，公开了一种基于阶梯式浓度培养的抗酒精菌群定向筛选方法，包括S1、选择初始菌株；S2、进行初步培养以使菌株适应培养基；S3、准备一系列含有逐渐增加酒精浓度的培养基；S4、逐步转移菌株至递增酒精浓度的培养基中；S5、在每个浓度级别上观察菌株的生长情况；S6、选择在高浓度酒精培养基中生长较好的菌株作为优良菌株。通过阶梯式浓度培养，能够有效地筛选和培育出具有较高耐酒精性的微生物菌株。这些菌株能够在高浓度酒精环境中生存和繁殖，这对于工业应用，具有重要的意义，同时该方法可以从特定的环境样本中，如酒厂废水、土壤、发酵食品等筛选出适应该环境的耐酒精菌群，大大提高了筛选的针对性和成功率。