本发明公开了一种玉米转化事件PX665的核酸序列及其特异性检测方法与应用，所述核酸序列包括SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2或其互补序列中的一种或多种。本发明提供的玉米转化事件PX665可实现将外源基因特异性引入到玉米品系中，赋予受体玉米耐受除草剂啶嘧磺隆、2甲4氯、烟嘧磺隆、草甘膦和草铵膦的能力。本发明提供的DNA检测方法能应用核酸扩增方法准确、稳定鉴定玉米转化事件PX665的存在，对实现PX665的研究、生产加工和应用进行溯源和全流程监管具有重要意义。