本发明提供了一种六神曲饮片、炒六神曲饮片及其制剂特征图谱的构建方法与应用，炒六神曲及其制剂特征图谱的构建方法，包括：制备供试品溶液；采用高效液相色谱法对供试品溶液进行检测，色谱条件包括以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇为流动相A，以0.08％‑0.4％甲酸为流动相B，并采用特定的洗脱程序，在缩短检测时间的同时还明显提高了多种有效成分的分离效果，使特征图谱中包含了更多的特征峰，极大丰富了图谱信息，实现了尿苷、胸腺嘧啶、没食子酸、鸟苷在内的特征峰的有效分离，得到的特征图谱特征性明显，充分反映炒六神曲的药物制剂的整体性和特征性，而基线平稳，峰形好，为全面检测六神曲饮片、炒六神曲及其药物制剂的质量提供依据。