本申请涉及催化剂技术领域，具体公开了一种氨氧化反应催化剂及其制备方法与应用。本申请提供的氨氧化反应催化剂以下组分：载体、V2O5和助剂，所述V2O5在氨氧化反应催化剂中的质量负载量5‑15%，所述载体为TiO2改性α‑Al2O3或SiO2改性α‑Al2O3；所述TiO2改性α‑Al2O3中，TiO2的质量分数为1‑10%；所述SiO2改性α‑Al2O3中，SiO2的质量分数为1‑5%。本申请还提供了上述氨氧化反应催化剂在氨氧化烷基吡啶制备氰基吡啶工艺中的应用。本申请提供的氨氧化反应催化剂具有催化效率高、稳定性好、可再生的优点，能够大大降低氨氧化烷基吡啶制备氰基吡啶的生产成本。