本发明提供了一种黄铜矿和黄铁矿的浮选分离抑制剂及制备方法和应用，涉及选矿技术领域。具体而言，所述浮选抑制剂包括碳化三聚氰酸钠、碱性硫脲、碱性聚合铁和碳酸盐；在进行黄铜矿和黄铁矿的浮选分离时，先将矿物研磨分级而后以一次粗选、两次扫选和两次精选的步骤进行浮选分离，收集得到铜精矿产品。本发明能够解决黄铜矿和黄铁矿的浮选分离过程中存在的铜铁分离效果差，以及加入石灰而导致的铜回收率低等缺陷；通过本发明的浮选工艺可以实现铜精矿中铜回收率达到92.48%，具有良好的应用前景。