本发明提供了一种同时检测松杉灵芝菌丝体中13种三萜化合物的方法，该方法包括如下步骤：(1)松杉灵芝菌丝体的预处理步骤；(2)超高效液相色谱检测步骤；(3)化合物质谱信息获得步骤；(4)超高效液相色谱‑三重四级杆质谱联用分析方法建立步骤；(5)数据分析步骤。本发明提供的同时检测松杉灵芝菌丝体中13种三萜化合物的方法，可以对松杉灵芝发酵菌丝体中代谢产生的13个三萜化合物同时进行准确的定性定量分析，灵敏度高，特异性强，从而为松杉灵芝菌丝体三萜化合物的研究和相关产品开发提供快速精确的检测分析方法。