本发明公开了一种碳酸钙微球佐剂及其制备方法与应用，本发明在不同的制备条件下以不同的混合方式制备碳酸钙微球，从而筛选出粒径均一、形貌均匀、性质稳定的碳酸钙微球的最佳制备条件；由0.3M的碳酸钠溶液和0.3M的氯化钙溶液在恒温磁力搅拌器下或超声等体积混匀制成的碳酸钙微球形貌均匀、粒径均一、疏松多孔，有利于实现对抗原的装载及释放，从而达到理想的免疫效果；而且本发明制备的碳酸钙微球安全性较高，可以低温冷冻干燥，不会影响结构改变，钙离子能够诱导体液免疫及CTL介导的细胞免疫，能够满足多种疫苗的临床需求。