本发明公开了检测来自尿液囊泡的蛋白标志物的试剂在制备乳腺癌诊断试剂盒中的应用。检测尿液细胞外囊泡来源的蛋白标志物的试剂在制备乳腺癌辅助诊断试剂中的应用，所述的尿液细胞外囊泡来源的蛋白标志物为ECM1和ANXA1的组合。通过流式细胞仪技术在50例健康人、100例良性乳腺结节患者和200例乳腺癌患者中分析发现，尿液细胞外囊泡来源的ECM1和ANXA1两种蛋白的组合能够有效将乳腺癌患者和健康人与良性乳腺结节患者区分开。总体来说，尿液细胞外囊泡中的蛋白可以作为检测标志物应用于乳腺癌的诊断、分期和预后。