本发明公开了一种双面结构不对称的鱼鳔膜的制备方法及应用，属于生物医学材料技术领域，包括以下步骤：将鱼鳔置于十二烷基苯磺酸钠溶液中浸泡，清洗，再将鱼鳔置于聚乙二醇辛基苯基醚溶液中浸泡，清洗，干燥，得到双面结构不对称的脱细胞鱼鳔膜。所述的双面结构不对称的鱼鳔膜力学性能优异，生物相容性好，具有极佳的屏障作用，能够有效阻止成纤维细胞的侵入，同时具有优异的降解性能和抗菌性能，其能够广泛的应用于GBR/GTR膜、组织修复膜、生物补片中，具有广泛的应用前景和市场价值。