本发明提供了一种羟基酪醇生产菌株及其构建方法与应用，所述菌株缺失了tyrR、tyrB、feaB基因，引入了T7 RNAP基因，上调了aroGfbr、tyrAfbr、talB基因，所述生产菌携带了质粒pET‑HT‑1，所述质粒异源表达了来源于Saccharomyes cerevisiae SCY4741的ARO10D331V和ADH6基因，以及来源于Klebsiella pneumoniae的hpaBC基因；随后对其发酵过程中的VB1添加量进行优化，以维持苯丙酮酸脱羧酶的辅酶供应，提高了羟基酪醇合成效率。所述菌株HT‑8能够高效利用葡萄糖从头合成羟基酪醇，为该产物的工业化规模生产奠定了坚实基础。