重组慢病毒Lenti-shRRP15的制备和特异性应用杀伤神经胶质瘤细胞
摘要:
本发明涉及重组慢病毒Lenti‑shRRP15的制备和特异性应用杀伤神经胶质瘤细胞。以一种siRNA序列为靶点的shRRP15引物进行化学合成,将引物等比例混和退火后,得到shRRP15序列,使用引物对慢病毒质粒pLKO.1进行PCR扩增,并进行琼脂糖凝胶回收,使用无缝克隆试剂盒连接shRRP15和质粒pLKO.1,得到慢病毒载体质粒pLKO‑shRRP15,应用细胞转染试剂盒SuperFect转染慢病毒质粒pLKO‑shRRP15和辅助载体质粒共转染293T细胞,细胞转染12小时后,更换细胞培养液;细胞培养24小时后,收集细胞培养上清,细胞继续培养24小时,再次收集细胞培养上清,离心收集病毒浓缩液,得到重组慢病毒Lenti‑shRRP15,利用慢病毒作为载体感染神经胶质瘤细胞,以核仁蛋白分子RRP15作为特异性抗肿瘤治疗的靶标,制备慢病毒Lenti‑shRRP15制剂进行神经胶质瘤治疗,具有高效、高特异、低副作用等巨大优势。
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