本发明提供了基于绵羊全基因组CRISPR‑Cas9敲除文库筛选绵羊卵泡颗粒细胞FSH应答基因，属于基因生物工程技术领域。本发明针对绵羊全基因组编码基因设计sgRNA探针，并构建绵羊全基因组CRISPR‑Cas9sgRNA文库，重点将绵羊2号、3号和X染色体编码基因的CRISPR‑Cas9sgRNA文库敲除绵羊卵泡颗粒细胞，构建了3条染色体的特异性敲除细胞库，基于该细胞敲除库可筛选出与FSH作用相关基因，并结合转录组测序进一步探究出FSH促进颗粒细胞增殖的剂量依赖性基因。